חלק 4. השפעות של שדות אלקטרומגנטיים בתדירות נמוכה במיוחד על עיכוב תאי הגידול והמנגנון האפשרי
טריפסין (זמן עיכול אופטימלי השתנה מתא לתא: 293 T, 1 דקה; HepG2, 1 דקות; A549, 2 דקות). העיכול
הופסק במדיום, וכל התאים נוספו לצינור הצנטריפוגה. ואז, החור ניקה עם
מלח רגיל פעמים רבות והוסיף לצינור הצנטריפוגה. בשלב זה, צינור הצנטריפוגה הכיל את כל התאים.
האם נותרו תאים בבור תחת המיקרוסקופ.
תאים מושעים: כל ההשעיות של התאים הוצבו בצינור צנטריפוגה. החורים נשטפו בנורמלי
מלח מספר פעמים והושם בצינור הצנטריפוגה. בשלב זה, צינור הצנטריפוגה הכיל את כל התאים. THE
נקבוביות נצפו בשאריות תאים תחת המיקרוסקופ.
ספירה: התאים היו צנטריפוגים, הושעו מחדש במדיום מתאים, מדוללים חלקית והוכתמו
עם טריפאן כחול. ואז, 10 μL ממנו הוזרק דרך זכוכית הכיסוי.
נוסחת חישוב: מספר התאים/4 × נפח × יחס דילול × 104.
התאים בכל קבוצה נספרו שלוש פעמים בסך הכל שלוש קבוצות.
איתור ערך pH.צבע פלואורסצנציה חדירה לממברנה BCECF AM ו- PH רגישים
Cent Probe 2 ', 7'-bis-(2- carboxyethyl) -5- carboxyfluorescein (Beotime Biotechnology, סין) שימשו כדי להעריך
ערך ה- pH התוך תאי. התאים טופחו ב- 96- צלחות באר ונחשפו לשדה מגנטי 5- mt, 20- Hz מגנטי
במשך שעתיים ביומיים הראשונים. ביום 3, התאים הוחזרו מחדש ב- 1 0 0 μl של 25 מיקרומטר BCECF AM ב- 0.04% פלורוני
F {{0}} פתרון עבודה ודגור בחממה CO2 ב 37 ± 0.18 מעלות למשך שעה. הסופר -נפט הוחלף
עם חיץ HHBS (AAT BioQuest, ארה"ב), והתאים היו נתונים לחשיפה לשדה מגנטי למשך שעתיים. THE
לאחר מכן הוחלף Supernatant ב- PBS, וערכי ה- pH נקבעו באמצעות ציטומטריה של זרימת FITC (FACS
קליבור, BD).
מבחני ריכוז סידן תאיים.צבע הקרינה החולנת בממברנה קלילרייט
520 בבוקר (AAT BioQuest) שימש כדי להעריך את ריכוז הסידן התאי. התאים טופחו ב
96- צלחות היטב ונחשפות לשדה מגנטי {1}} mt, 20-} Hz מגנטי למשך שעתיים ביומיים הראשונים. ביום 3 התאים היו
הוחזר מחדש ב- 1 0 0 μl של 5 מיקרומטר Calbryte 520 AM ב -04% פלורוני F -127 פתרון עבודה ודגור ב
חממה CO2 ב 37 ± 0. 18 מעלות למשך שעה. Supernatant הוחלף במאגר HHBS (AAT BioQuest), וה-
התאים נחשפו לשדה המגנטי למשך שעתיים. לאחר מכן הוחלף ה- Supernatant ב- PBS, וה-
ערכי ריכוז הסידן של LULAR נקבעו באמצעות ציטומטריה של זרימת FITC (FACS CALIBUR).
קביעת פוטנציאל הממברנה של תאים.פוטנציאל הממברנה נקבע באמצעות ה-
צבע פלואורסצנטי רגיש פוטנציאלי ביס- (1, 3- חומצה דיבוטילברביטורית) טרימתין אוקונול (DIBAC4) (3) (AAT BIO
לַחקוֹר). הצבע הפלואורסצנטי DIBAC4 (3) חלחל לתאים המפוטרים עם פוטנציאל קרום גבוה,
מה שמוביל לעלייה בעוצמת הקרינה התוך תאית. DIBAC4 (3) שוחרר מההיפרפו
תאים מרגיזים ועוצמת הקרינה התוך תאית פחתה. התאים טופחו ב 96- צלחות באר ו
נחשף ל- 5- mt, 20- Hz שדה מגנטי למשך 2 שעות ביומיים הראשונים. התאים טופחו ב 100 μl של HHBs.
ביום 3, התאים הוחזרו מחדש ב- 1 0 0 μl של 10 מיקרומטר DIBAC4 (3) AM ב- 0.04% פלורוני f -127 סולו עובד
tion ודגור בחממה CO2 ב 37 ± 0. 18 מעלות למשך שעה. הסופר -נפט הוחלף במאגר HHBS
(AAT BioQuest), והתאים נחשפו לשדה המגנטי למשך שעתיים. לאחר מכן הוחלף הסופר -נפט
PBS ופוטנציאל קרום התא נקבע באמצעות ציטומטריה של זרימת FITC (FACS Calibur).
איתור נתרן יון.התאים טופחו ב- 96- צלחות באר ונחשפו ל- 5- mt, 20- Hz Magnetic
שדה למשך שעתיים ביומיים הראשונים. ביום 3, המדיום הוחלף ב 100 μl של HHBs ו- 100 μl של 10 מיקרומטר
SBFI AM (Cayman Chemical) ב 0. 04% פלורוני F -127 פתרון עבודה. הסופר -נפט הוחלף ב
מאגר HHBS (AAT BioQuest) לאחר {{0}} h דגירה בחממה CO2 ב 37 ± 0.18 מעלות, והתאים נחשפו
לשדה המגנטי למשך שעתיים. יון הנתרן נקבע ב 330/80 עירור ופליטה 528/20 באמצעות א
בוחן מיקרו -פלטים.
איתור יון אשלגן.התאים טופחו ב- 96- צלחות באר ונחשפו ל- 5- mt, 20- Hz mag
שדה נטו למשך שעתיים ביומיים הראשונים. ביום 3, המדיום הוחלף ב 100 μl של HHBs ו- 100 μl של
1 0 μM PBFI AM (Cayman Chemical) בפתרון עבודה של 0.04% פלורוני F -127. לאחר 4- h דגירה ב- CO2
חממה ב 37 ± 0.
נחשף לשדה המגנטי למשך שעתיים. קביעת יון האשלגן נערכה ב 330/80 עירור ו
פליטה 528/20 באמצעות בודק מיקרו -פלייט.
צביעה כחולה טריפאן.293 T, HepG2 ו- A549 תאים בשלב הגידול הלוגריתמי עוכלו טריפסין
ונקצר. תאי רג'י נאספו ישירות. לאחר צנטריפוגה, התאים הוכתמו בחיוניים
צבע טריפאן כחול. התאים החיים נספרו תחת מיקרוסקופ אור הפוך (קרל זייס, גרמניה). התא
נקבעו שיעורי עיכוב הצמיחה, ותוכננו עקומות ייצוגיות. שיעור עיכוב (%)=(num
BER של תאים בקבוצת הביקורת - מספר תאים בקבוצת השדה המגנטי) / מספר התאים בבקרה
קבוצה × 100%.
ניתוח סטטיסטי.כל הנתונים באו לידי ביטוי כממוצע ± שגיאה סטנדרטית של הממוצע, וניתוח חד כיווני של
השונות שימשה להשוואה בין קבוצות מרובות. מבחן T של הסטודנט שימש להשוואה בין הטיפול
לעומת קבוצות לא מטופלות. ערך AP<0.05 indicated a statistically significant difference. The confirmatory results
בעמ '<0.05 were obtained from repeating studies at least two times. Each set of experiments had three parallel
דגימות וכל ניסוי חזרו על עצמם שלוש פעמים.
זמינות נתונים
כל הנתונים מוצגים במאמר שפורסם ובקובץ משלים זה.
הפניות
1. Zhang, X. et al. שדות מגנטיים בתדר נמוך במיוחד (5 0 הרץ, 0.8 MT) יכולים לגרום לספיגת רמות הסידן התוך תאית
באוסטאובלסטים. ביוכימיה. ביו -פיס. מילואים קומונה. 396 (3), 662–666 (2010).
2. Li, J. et al. אפופטוזיס סטטי מגנטית טבעית הנגרמת על ידי שדה תאי סרטן הכבד. אלקטרומג ביול. MED. 33 (1), 47–50 (2014).
3. Koh, Ek et al. A 60- Hz שדה מגנטי סינוסואידי גורם לאפופטוזיס של תאי סרטן הערמונית באמצעות מיני חמצן תגובתי. Int.
ג'יי רדיאט. ביול. 84 (11), 945–955 (2008).
4. קמרון, איל ואח '. שדה אלקטרומגנטי טיפולי (TEMF) והקרנת גמא על גידול קסנוגרפט של סרטן השד האנושי,
אנגיוגנזה וגרורות. תאי סרטן Int. 5, 23 (2005).
5. De Seze, R. et al. השפעות של 100 MT זמן משתנות שדות מגנטיים על צמיחת הגידולים בעכברים. ביו -אלקטרומגנטיקה 21 (2), 107–111
(2000).
6. Novikov, VV, Novikov, GV & Fesenko, EE השפעה של Static Static משולב חלש ותדר נמוך במיוחד מגנטי לסירוגין
שדות על גידול גידולים בעכברים שחוסנו עם קרצינומה מיימת אריליך. ביו -אלקטרומגנטיקה 30 (5), 343–351 (2009).
7. טטרוב, I. et al. השפעת שדות מגנטיים על צמיחת הגידול וכדאיות. COMP. MED. 61 (4), 339–345 (2011).
8. Tofani, S. et al. הישרדות מוגברת של עכברים, עיכוב גידול הגידול וירידה ב- P53 חיסוני לאחר חשיפה למגנטי
שדות. ביו -אלקטרומגנטיקה 23 (3), 230–238 (2002).
9. Tofani, S. et al. שדות מגנטיים סטטיים ו- ELF גורמים לעיכוב צמיחת הגידול ואפופטוזיס. ביו -אלקטרומגנטיקה https://doi.org/
10.1002/bem.69 (2001).
10. וויליאמס, CD et al. השפעות שדה אלקטרומגנטיות טיפוליות על אנגיוגנזה וצמיחת גידולים. מילואים נגד סרטן. 21 (6 א), 3887–
3891 (2001).
11. Yamaguchi, S. et al. השפעות של גירוי מגנטי פועם על התפתחות הגידול ותפקודי החיסון בעכברים. ביו -אלקטרומג
Netics 27 (1), 64–72 (2006).
12. Berg, H. et al. השפעות שדה ביו -אלקטרומגנטיות על תאי סרטן וגידולים בעכברים. אלקטרומג ביול. MED. 29 (4), 132–143 (2010).
13. Liang, Y. et al. עוצמה משופרת של daunorubicin כנגד תת-תרופות עמידות בפני תרופות kb-chr -8-5-11 על ידי שדה מגנטי פועם.
מילואים נגד סרטן. 17 (3C), 2083–2088 (1997).
14. Omote, Y. et al. טיפול בגידולים ניסיוניים עם שילוב של שדה מגנטי פועם ותרופה נוגדת -נוגדת. JPN. ג.
מילואים סרטניים. 81 (9), 956–961 (1990).
15. Xu, L. et al. השפעה מעכבת סינרגיסטית של שדה מגנטי סטטי ותרופות נגד גידולים על תאי HEPA 1-6. שנג וו גונג צ'נג XUE
BAO 31 (9), 1363–1374 (2015).
16. Gellrich, D., Becker, S. & Strieth, S. שדות מגנטיים סטטיים מגדילים את דליפות המיקרו -ע של הגידול ומשפר
בשילוב עם paclitaxel. סרטן Lett. 343, 107–114 (2014).
17. El-Bialy, NS & Rageh, MM שדה מגנטי בתדר נמוך במיוחד משפר את היעילות הטיפולית של ציספלטין במינון נמוך
הטיפול בקרצינומה של ארליך. ביו. מילואים Int. 2013, 189352 (2013).
18. Gellrich, D. et al. אפנון של חשיפה לשדה מגנטי סטטי משפיע על טיפול ממוקד בגידולים מוצקים in vivo. מילואים נגד סרטן.
38, 4549–4555 (2018).
19. Crocetti, S. et al. עוצמה נמוכה ותדר שדות אלקטרומגנטיים פועמים פוגעים באופן סלקטיבי בכדאיות תאי סרטן השד. Plos
אחד 8 (9), E72944 (2013).
20. Raylman, RR, Clavo, AC & WAHL, RL חשיפה לשדה מגנטי סטטי חזק מאט את צמיחת תאי הסרטן האנושי במבחנה.
ביו -אלקטרומגנטיקה 17 (5), 358–363 (1996).
21. Wang, T. et al. מעורבות של ביטוי אמצעי בהשפעות המעכבות של שדות מגנטיים בתדר נמוך על תאי סרטן. ביו
אלקטרומגנטיקה 32 (6), 443–452 (2011).
22. באקנר, CA et al. עיכוב של צמיחת תאי סרטן על ידי חשיפה לשדה אלקטרומגנטי משתנה בזמן כרוך מסוג T
תעלות סידן. PLOS ONE 10 (4), E0124136 (2015).
23. Wang, MH et al. השפעת פרמטרים של שדה אלקטרומגנטי בתדירות נמוכה במיוחד על התפשטות סרטן השד האנושי.
אלקטרומג. ביול. MED. 40 (3), 384–392 (2021).
24. Kim, Sh et al. ביו -רעילות ביולוגית בחולדות Sprague - Dawley שנחשפו לשדה מגנטי משולש של 20 קילו הרץ למשך 90 יום. ביו -אלקטרומג
Netics 27 (2), 105–111 (2006).
25. Ashdown, CP et al. שדות מגנטיים בתדר נמוך פועמים גורמים לשיבוש ממברנה הגידול ושינוי כדאיות התאים. ביו -פיס.
J. 118, 1552–1563 (2020).
26. ווטסון, JM, Parrish, EA & Rinehart, CA עוצמה סלקטיבית של צמיחת תאי סרטן גינקולוגי במבחנה על ידי אלקטרומגנטי
שדות. גינקול. אונקול. 71 (1), 64–71 (1998).
27. Zhou, Y. et al. הולכת אות. פוטנציאל הממברנה מווסת את הדינמיקה הפוספוליפידית של קרום הפלזמה ואת איתות K-RAS.
מדע 349, 873–876 (2015).
28. Berzingi, S., Newman, M. & Yu, HG שינוי ביו -אלקטרוני על עיכוב תאי סרטן השד האנושי. תאי סרטן Int. 16, 72
(2016).
29. לסלי, TK et al. הומאוסטזיס נתרן במיקרו -סביבת הגידול. ביוכים. ביו -פיס. ACTA הכומר סרטן 1872 (2), 188304
(2019).
30. Wang, XX et al. ניתוח ביטוי מתילציה של DNA בקנה מידה גדול על פני 12 סרטן מוצק מגלה היפר-מתילציה ב
מסלול איתות סידן. Oncotarget 8 (7), 11868–11876 (2017).
תודות
אנו מודים לפרופסור פיטר ק. החוק מהמכון לטיפול בתאים, ווהאן, סין, על סיוע טכני.
תרומות מחבר
JS עיצבה את המחקר, ביצעה את מרבית הניסויים, ניתחה נתונים וכתבה את כתב היד. HW
מומלץ לעיצוב ניסוי ועזר בניסויים. YJ, XJ, YC ו- YYT השתתפו בעיצוב המחקר
וביצע ניסויים. וויג 'הגיב על כתב היד. ZM, KC, XDL, ZLC ו- JMW Partici
המופעל בייצור ומדידה של מכשירי שדה מגנטי. Ghy עיצב ופיקח על
חקר, פירש נתונים וכתב את כתב היד.
מימון
הקרן המיוחדת למניעת סרטן וטיפול בשנחאי פון פיתוח מדע וטכנולוגיה
Dation (מספר מענק CT20200517A).
תחומי עניין מתחרים
הכותבים מצהירים על אינטרסים מתחרים.
מידע נוסף
מידע משליםהגרסה המקוונת מכילה חומר משלים זמין בכתובת https://doi.org/
10.1038/s41598-023-34144-5.
הִתכַּתְבוּתיש לפנות לבקשות לחומרים
מידע על הדפסים והרשאותזמין בכתובת www.nature.com/reprints.
הערת המו"להטבע של שפרינגר נותר נייטרלי ביחס לתביעות שיפוט במפות שפורסמו ו
שיוך מוסדי.
גישה פתוחהמאמר זה מורשה תחת ייחוס Creative Commons 4. 0 Internationalרישיון, המאפשר שימוש, שיתוף, התאמה, הפצה ורבייה בכל מדיום או
פורמט, כל עוד אתה נותן קרדיט מתאים לסופר / ים המקוריים ולמקור, ספק קישור ל
רישיון Creative Commons, ומציין אם בוצעו שינויים. התמונות או חומר צד שלישי אחר בזה
המאמר כלול ברישיון Creative Commons של המאמר, אלא אם כן מצוין אחרת בקו אשראי ל
חוֹמֶר. אם החומר אינו נכלל ברישיון Creative Commons של המאמר והשימוש המיועד שלך אינו
מותר על ידי רגולציה סטטוטורית או חורג מהשימוש המותר, תצטרך לקבל אישור ישירות מ
בעל זכויות היוצרים. לצפייה בעותק של רישיון זה, בקרו בכתובת http://creativecommons.org/licenses/by/4. {1 }/.
© המחבר (ים) 2023